便(biàn)攜式三聚氰胺(àn)檢(jiǎn)測儀/酶(méi)標儀(yí) 型號(hào):DP-MB100
產品描(miáo)述(shù) 
檢(jiǎn)測方法(fǎ)
DP-MB100便(biàn)攜(xié)式三(sān)聚(jù)氰胺檢測儀，利(lì)用(yòng)酶(méi)聯(lián)免疫吸(xī)附(fù)測(cè)定法用食品及飼(sì)料(liào)中三聚氰胺的定(dìng)量(liáng)測定。
檢測原理(lǐ)
DP-MB100便攜式三聚氰(qíng)胺檢測儀(yí)，酶(méi)聯免疫(yì)吸附測(cè)定(dìng)法定(dìng)量測(cè)定三(sān)聚(jù)氰(qíng)胺殘留(liú)。利用萃(cuì)取液(yè)通過均(jūn)質(zhì)及(jí)振蕩(dàng)的方(fāng)式提(tí)取(qǔ)樣(yàng)品中的三聚(jù)氰胺(àn)行免(miǎn)疫測定(dìng)。將(jiāng)三聚氰胺酶標記(jì)物，樣品萃取(qǔ)物及(jí)標(biāo)準(zhǔn)加(jiā)入到已(yǐ)經包(bāo)被(bèi)有三(sān)聚氰胺抗體的(dí)微孔中(zhōng)開始反(fǎn)應(yīng)。在(zài)30分鐘的孵育(yù)過程中(zhōng)，樣品萃取物中的(dí)三聚(jù)氰胺與三聚氰胺(àn)酶(méi)標(biāo)記物競爭結合(hé)微孔中的(dí)三(sān)聚(jù)氰(qíng)胺抗(kàng)體(tǐ)，孵(fū)育30分(fēn)鐘後洗(xǐ)掉小(xiǎo)孔中所有沒(méi)有結合的(dí)三聚氰胺及(jí)三(sān)聚氰胺酶(méi)標(biāo)記物。在(zài)用去離(lí)子(zǐ)水(shuǐ)清洗結束後(hòu)，每孔中加入清(qīng)澈(chè)的底(dǐ)物溶液，結(jié)合的酶(méi)標(biāo)記(jì)物將(jiāng)無色的底物轉化(huà)為藍色的物質。孵育(yù)30分鐘後(hòu)停止此反應(yīng)，根據(jù)各(gè)孔顏色深淺(qiǎn)行(háng)數據讀取。依(yī)據(jù)標準的顏(yán)色得(dé)出(chū)樣品(pǐn)中三(sān)聚氰(qíng)胺的的濃度(dù)值。 
實驗所(suǒ)需設備及材料
三聚氰(qíng)胺檢(jiǎn)測試劑盒(hé)（目(mù)前(qián)常用口(kǒu)試劑有美Abraxis公(gōng)司(sī)和美Beacon公(gōng)司(sī)的）
318C酶(méi)標儀台(tái)或(huò)DP-MB100便(biàn)攜式(shì)三(sān)聚氰(qíng)胺檢(jiǎn)測儀（配有450nm濾光片）
1－5ml可調移液器
100－1000ul可(kě)調移(yí)液(yè)器(qì). 
20－200ul可調移(yí)液器(qì). 
蒸(zhēng)餾水或(huò)去離子水.. 
可(kě)吸取50ul的(dí)移液器(qì)及吸頭. 
可吸(xī)取50ul和100ul的八(bā)道移(yí)液(yè)器(qì)及(jí)吸頭. 
吸水紙或相(xiāng)當的吸水(shuǐ)材(cái)料. 
450nm的酶標儀(yí). 
計時器(qì). 
洗(xǐ)瓶 
混旋器. 
20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸(zhēng)餾水定(dìng)容(róng)至1000ml.
注意事(shì)項 
zui好配(pèi)套使用(yòng)試劑，不要同其(qí)它(tā)公(gōng)司(sī)的(dí)產(chǎn)品混(hùn)用，不(bù)要將不(bù)同批次(cì)的產品混用。 
樣品稀(xī)釋或(huò)含有雜質(zhì)很可(kě)能對結果的準確性有(yǒu)影響。 
不要使用過(guò)期(qī)的產(chǎn)品(pǐn)。 
使(shǐ)用之前(qián)將所(suǒ)有(yǒu)試劑(jì)回升至室溫(wēn)，但(dàn)不(bù)要(yào)放置(zhì)過24小(xiǎo)時。 
三聚氰胺(àn)屬於(yú)有毒性的化(huà)學(xué)品(pǐn)，請小(xiǎo)心(xīn)處理。 
停止(zhǐ)液是1N鹽(yán)酸，避免接觸(chù)皮膚。 
樣(yàng)品(pǐn)製備（以美(měi)Beacon試劑(jì)為例）
濕的(dí)寵(chǒng)物食品萃(cuì)取方法（稀釋(shì)倍數(shù)：100） 
均(jūn)質樣品至(zhì)布丁狀。 
稱取(qǔ)2g樣品加(jiā)入(rù)10mL 60%甲(jiǎ)醇(chún)/水(shuǐ)溶液，並(bìng)劇烈(liè)振(zhèn)蕩。 
聲萃取(qǔ)1分鐘。 
漩渦混合1分鐘，然後靜置(zhì)5分鐘，使(shǐ)樣品(pǐn)分(fēn)層。 
3000 g 室(shì)溫(wēn)離心5分鐘(zhōng)。 
用(yòng)玻璃纖維(wéi)濾紙過濾上(shàng)清(qīng)液(yè)，並(bìng)將(jiāng)萃取液收集(jí)於幹淨試管中(zhōng)。 
用樣品稀釋液(yè)將(jiāng)濾液(yè)20倍稀釋（如(rú)：0.1mL濾液(yè)+1.9mL 10%甲(jiǎ)醇(chún)/20mMPBS） 
移(yí)取(qǔ)150 ul 行(háng)分析。 
注意(yì)：用此(cǐ)方法(fǎ)測(cè)定了(liǎo)8個添加有15ppm三聚(jù)氰(qíng)胺(àn)的(dí)貓糧（非要(yào)求召回(huí)），回收率範(fàn)圍為75%-117%。 
本(běn)方法(fǎ)隻可作(zuò)為樣(yàng)品(pǐn)篩選(xuǎn)方(fāng)法(fǎ)，不可作為(wéi)zui終確(què)認(rèn)方(fāng)法。 
小(xiǎo)麥麵(miàn)筋蛋白(bái)萃取(qǔ)方法：（稀(xī)釋倍數：500） 
1.均質(zhì)或(huò)混匀小麥(mài)麵筋蛋(dàn)白樣(yàng)品(pǐn)。 
2.稱(chēng)取(qǔ)0.2g均質好(hǎo)的(dí)樣(yàng)品(pǐn)加(jiā)入10mL 酸化(huà)的(dí)60%甲醇(chún)/水(shuǐ)溶液(1mL 1N HCl/ 100mL 60%甲醇(chún)/水(shuǐ))。 
3.漩(xuán)渦混(hùn)合並(bìng)聲萃(cuì)取，使(shǐ)樣品溶解(jiě)（確保(bǎo)樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)沒有(yǒu)結塊）。 
4.用樣品(pǐn)稀釋液(yè)稀(xī)釋萃(cuì)取液按照1:10比(bǐ)例(lì)。（0.5mL+4.5mL 10%MeOH/20 mM PBS）。 
5.10000轉/分離心上(shàng)清液10分(fēn)鐘。 
6.用G6玻璃(lí)纖(xiān)維濾(lǜ)紙過濾(lǜ)上清液(yè)，並將(jiāng)萃取(qǔ)液收集於(yú)幹淨試管中(zhōng)。 
7.移取150 ul 行分(fēn)析(xī)。 
注(zhù)意：如果(guǒ)樣品中含有(yǒu)大量(liáng)的(dí)添加物，需要加入(rù)更(gēng)大量(liáng)的萃(cuì)取溶液(yè)，以保證萃取(qǔ)效率。 
操(cāo)作(zuò)人依(yī)據自己的(dí)判(pàn)斷力，如果測試結果，需要(yào)加入兩倍的萃取溶(róng)液（0.2/20mL），行(háng)二(èr)次測定。 
幹的寵(chǒng)物(wù)食品(pǐn)萃取方(fāng)法(fǎ)（稀釋(shì)倍數(shù)：200） 
1.質器均質幹的(dí)寵物飼(sì)料樣品(pǐn)。 
2.稱(chēng)取(qǔ)1g樣(yàng)品(pǐn)加入(rù)10mL 60%甲醇/水溶(róng)液，並劇(jù)烈振蕩。 
3.聲萃取1分鐘(zhōng)。漩(xuán)渦混(hùn)合1分(fēn)鐘，然後靜(jìng)置5分鐘，使樣品(pǐn)分層(céng)。 
4.3000 g 室溫離(lí)心(xīn)5分鐘。 
5.用G6玻璃纖維(wéi)濾(lǜ)紙(zhǐ)過濾上(shàng)清液，並將(jiāng)萃取(qǔ)液收集(jí)於(yú)幹淨試管(guǎn)中。 
6.用樣品(pǐn)稀釋液將濾(lǜ)液(yè)20倍(bèi)稀釋（如：0.1mL濾液(yè)+1.9mL 10%甲醇(chún)/20mMPBS） 
7.移(yí)取(qǔ)150 ul 行分析(xī)。 
免(miǎn)疫測(cè)定(dìng)過程 (注(zhù)意: 標(biāo)準及(jí)樣(yàng)品zui好做平行試驗(yàn)以增加(jiā)準確(què)度) 
將所(suǒ)有試劑及樣品(pǐn)回升至(zhì)室(shì)溫(wēn)20-280C，但(dàn)不要(yào)放置過(guò)24小(xiǎo)時。 
從(cóng)鋁箔(bó)袋中(zhōng)拿(ná)出要(yào)求數量的微(wēi)孔條(tiáo)，放入幹燥(zào)劑並(bìng)重新封好袋子以免微孔(kǒng)條(tiáo)受(shòu)潮 
吸取(qǔ)150ul標(biāo)準(zhǔn)，樣(yàng)品到對應微孔中，保(bǎo)證每(měi)種(zhǒng)溶液(yè)使用(yòng)幹淨(jìng)的(dí)吸頭吸(xī)取(qǔ)，避(bì)免交(jiāo)叉(chā)汙染。加入(rù)50ul三聚氰(qíng)胺酶(méi)標(biāo)記溶(róng)液到(dào)每個(gè)小孔中(zhōng)。 
混(hùn)合60秒，20-28攝氏度(dù)下(xià)孵(fū)育30分鐘。 
將(jiāng)微孔(kǒng)中(zhōng)的溶(róng)液倒入(rù)水(shuǐ)槽中，用(yòng)蒸(zhēng)餾水(shuǐ)充滿微孔(kǒng)，震(zhèn)蕩(dàng)後(hòu)倒(dǎo)掉(diào)，重(zhòng)復三次，總(zǒng)共(gòng)四(sì)次(cì)洗板(bǎn)。 
在吸水(shuǐ)紙上拍打(dǎ)，盡(jìn)可能將(jiāng)水(shuǐ)拍幹(gān)。 
每個微孔中加(jiā)入100ul底(dǐ)物溶液。 
20-28攝氏(shì)度下，孵育(yù)30分(fēn)鐘。 
每個(gè)微(wēi)孔中加(jiā)入(rù)100ul停止液。 
450nm下讀板。 
結果分析(xī) 
DP-MB100便攜式(shì)三聚(jù)氰胺檢測(cè)儀，半定量的結果(guǒ)是由樣品的吸光率(shuài)與(yǔ)標(biāo)準的吸光率的簡單(dān)對(duì)比而來判定:樣(yàng)品的(dí)顏色比標準的(dí)顏色(sè)淺則三聚氰胺的(dí)濃(nóng)度比標(biāo)準(zhǔn)樣的(dí)濃度(dù), 樣品(pǐn)的顏(yán)色比標準(zhǔn)的(dí)顏(yán)色深(shēn)則(zé)三(sān)聚(jù)氰胺的濃(nóng)度(dù)比(bǐ)標(biāo)準(zhǔn)樣的(dí)濃(nóng)度(dù)低。 
定(dìng)量分析(xī)需要(yào)繪製以(yǐ)標準樣的吸光(guāng)率為X軸,以標準(zhǔn)樣(yàng)的濃(nóng)度的半對(duì)數為(wéi)Y軸的(dí)曲綫圖.依(yī)據(jù)標準樣(yàng)吸光(guāng)率的點(diǎn)畫(huà)成直綫,如(rú)此(cǐ)樣(yàng)品(pǐn)的光吸收率可(kě)在綫上找(zhǎo)到,與此相對應的Y軸(zhóu)則為(wéi)樣品的濃(nóng)度,樣品(pǐn)光吸收(shōu)率範圍(wéi)應(yīng)比標準樣的zui底範圍,比zui範(fàn)圍低, 即可(kě)說明此樣品中三聚氰(qíng)胺的含(hán)量大(dà)於(yú)500ppb或小(xiǎo)於20ppb。
 DP-MB100便(biàn)攜(xié)式三聚(jù)氰胺檢(jiǎn)測儀(yí)操(cāo)作步驟：
 
試(shì)劑盒大(dà)同(tóng)小異；
１．將樣品(pǐn)用甲醇或水提取(qǔ)，離心(xīn)
２．將(jiāng)試(shì)劑(jì)盒梅(méi)標(biāo)板(bǎn)室溫下(xià)回(huí)溫至(zhì)少個小時
３．提取液＼標(biāo)準１５０微(wēi)升，移入(rù)酶(méi)標(biāo)板(bǎn)井
４．加(jiā)入ＨＲＰ５０微(wēi)升
５．震動(dòng)，反(fǎn)應(yīng)３０分鐘(zhōng)
６．倒(dǎo)掉反應液(yè)，用清洗液(yè)衝洗４次，吸水紙吸水(shuǐ)
７．加(jiā)入(rù)色(sè)原底物(wù)１００微升，放置(zhì)３０分鐘
８．加(jiā)入終(zhōng)止液(yè)１００微升，
９．１５分鐘後(hòu)４５０ｎｍ下(xià)比色
１０．根(gēn)據標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫，計算三(sān)聚(jù)氰胺的濃度(dù)
試(shì)劑盒，酶標儀４５０ｎｍ，１０００微(wēi)升＼２００微(wēi)升，５０微(wēi)升(shēng)移液(yè)槍和八道(dào)移液槍，吸(xī)水紙(zhǐ)，槍(qiāng)頭等。
注(zhù)意移液時(shí)間和(hé)避免(miǎn)交(jiāo)叉汙(wū)染(rǎn)。每(měi)次要有(yǒu)標準(zhǔn)曲(qū)綫。